Выделение днк и рнк из клеточных культур

Замороженный материал переносили в раствор ГТЦ и гомогенизировали 4-5 ударами в гомогенизаторе Даунса. Гомогенат прогревали при 55°С в течение 5 мин, наслаивали на подушку 5.7 М CsCl и центрифугировали при 30 тыс. об/мин при 18°С в течение 18 ч с использованием ротора SW50 (Beckman). После центрифугирования фракцию, несущую клеточную ДНК и находящуюся на поверхности цезиевой "подушки", переносили в стеклянные пробирки, а оставшееся содержимое роторных пробирок сливали. Осадок РНК, находящийся на дне пробирок, растворяли в бидистиллированной воде и переосаждали ацетатом

№ рН 5.0 - этанолом (см. "Материалы и методы", п. 13).

х

К фракции ДНК добавляли 4 объема буфера 1 STE - 1% SDS. Затем добавляли равный объем смеси хлороформ - изоамиловый спирт (24:1) и экстрагировали ДНК 5 мин. После разделения фаз центрифугированием отбирали верхнюю фазу и процедуру повторяли. Затем ДНК осаждали 3

объемами этанола и центрифугировали при 20 тыс. об/мин при 4°С. Осадок

х

ДНК промывали 75% этанолом на 1 STE, высушивали и растворяли в бидистиллированной воде.<< ПредыдушаяСледующая >>
Внимание, только СЕГОДНЯ!