Тесты на антиспермальные антитела, как проводятся
Какие тесты следует использовать для определения антиспермальных антител?
Единственные надежные тесты на антиспермальные антитела - это те, с помощью которых учитывают присоединение антител к поверхности живого подвижного сперматозоида.
Использование нежизнеспособной спермы для тестирования недопустимо, так как антитела прилипают неспецифически к ней, давая ложноположительные результаты.
Как дифференцировать различные тесты для определения антиспермальных антител? Из тестов на антиспермальные антитела интерес представляют только те, которые позволяют определить связывание антител с поверхностью живых подвижных сперматозоидов.
Анализ связывания иммуноглобулинов
Анализ связывания иммуноглобулинов осуществляют при помощи шариков, покрытых антителами против разных изотипов иммуноглобулинов - IgG, IgA и IgM.
Антитела в сперматозоидах
С целью определения антител в эякулированных сперматозоидах свежий образец спермы несколько раз отмывают для удаления семенной жидкости и затем инкубируют сперматозоиды с разными шариками, покрытыми антителами. Антитела на шариках связываются с антиспермальными антителами на сперматозоидах. Спустя несколько минут образец помещают на предметное стекло и исследуют под микроскопом. 100 подвижных сперматозоидов проверяются на наличие шариков, которые связаны с поверхностью их головки, среднего отдела или хвоста. Отмечают количество подвижных сперматозоидов с шариком, приходящиеся на каждый изотип антител, и участок связывания на каждом сперматозоиде.
Антиспермальные антитела в сыворотке
Для определения антиспермальных антител в сыворотке или цервикальной слизи сперматозоиды от партнера (предпочтительно) или от донора спермы доказанной фертильности, прошедшего обследование на наличие антиспермальных антител на поверхности сперматозоидов, которое показало отрицательные результаты, инкубируют с разведением сыворотки или цервикальной слизи при 37 градусов С в течение 60 мин. Затем сперматозоиды тщательно отмывают для удаления любых несвязанных антител и определяют скопление антител из сыворотки или цервикальной слизи на поверхности сперматозоидов при помощи шариков (bead binding), как описано выше.
Видео: Бесплодие 3. Индивидуальная несовместимость и иммунология.
MAR тест
Для проведения теста MAR неотмытую свежую сперму смешивают на предметном стекле с эритроцитами барана, покрытыми IgG или IgA. Вместо эритроцитов барана иногда используют латексные частицы. Затем в раствор, рассматриваемый под микроскопом, помещают антитела к человеческим IgG или IgA.
Видео: Анализ крови на антитела
Если на сперматозоидах присутствуют антитела, будут видны эритроциты, адгезированные к сперматозоидам. В итоге, если имеются антиспермальные антитела, будут видны большие агрегаты сперматозоидов.
Тест MAR можно также использовать для определения антител в сыворотке путем инкубации свободных от антител сперматозоидов с сывороткой, как описано для анализа связывания иммуноглобулинов, а затем проверки на наличие сперматозоидов, связанных с антителами.
И анализ связывания иммуноглобулинов, и тест MAR могут быть модифицированы для определения антиспермальных антител в цервикальной слизи. Цервикальную слизь вначале необходимо разжижить путем инкубации в бромелине в течение короткого периода. Образец центрифугируют и поверхностный слой исследуют на антиспермальные антитела при помощи косвенного иммуноглобулинового анализа или теста MAR.
С.С.Bиткин
