Определение фенолов, бенз(а)пирена, нитратов и нитритовв мясных продуктах
Цель занятия: Изучить методы определения фенолов и бенз(а)пирена в копченных мясных продуктахЗадачи:
1. Подготовить исследуемые пробы
2. Определить границы проникновения фенолов в колбасных изделиях
3. Изучить качественные и количественные методы определения бенз(а)пирена
4. Изучить методы определения нитратов и нитритов
Определение фенолов в копченных мясных продук-тах
Объекты исследования. Копченые колбасные изделия различного группового ассортимента или копчености.
Материалы, реактивы и оборудование. Раствор ацетона массовой долей 50%- раствор тетрабората натрия массовой долей 0,5%- раствор 4-аминоантипирина массовой долей 2%- раствор гексацианоферрата калия (II) массовой долей 8%- гваякол (для построения калиброчного графика)- раствор персульфата аммония массовой долей 20%- раствор карбоната натрия массовой долей 1%- проявитель- фильтровальная бумага- дистиллированная вода- фотоэлектроколориметр ФЭК-56М или КФК-2- мерные колбы вместимостью 50 см3- мерный цилиндр вместимостью 150 см3- пипетки вместимостью 1, 5, 10 см3- колориметрические пробирки- коническая колба вместимостью 250 см3- стеклянная палочка- бумажный фильтр «синяя лента»- весы технические, вибровстряхиватель- гидроксид натрия NaOH и его водный раствор молярной концентрацией 0,1 моль/дм3- серная кислота H2SO4 и ее раствор массовой долей 25%- сульфат цинка ZnSO4 и его водный раствор массовой долей 0,45%- нитрит натрия NaNO2 и его свежеприготовленный водный раствор массовой долей 0,5%- гидроксид аммония NH4OH и его раствор массовой долей 10%- стандартный водный раствор фенола (с = 1 мг/см3).
Методические указания. Фенольные соединения обладают токсическим и даже канцерогенным действием, в связи с чем количество их в пищевых продуктах должно быть сведено до минимума. Для гарантии экологической чистоты пищевых продуктов необходимо строго контролировать содержание фенолов.
При копчении фенолы сначала интенсивно накапливаются в по-верхностном слое. В дальнейшем проникновение их в колбасу значи-тельно замедляется. Одновременно происходит диффузия фенольных компонентов дыма во внутренние слои колбасы. На последней стадии копчения и сушки количество фенольных соединений в поверхностном слое уменьшается почти наполовину и заметно возрастает во всех внутренних слоях колбасного батона. Фронт проникновения фенольных соединений внутрь колбасного батона тесно связан с химическим составом сырья и технологическими режимами про-изводства копченых изделий и характеризует качество копчения. Например, фенолы хорошо растворяются в жире. В жировой ткани их в 1,5 раза больше, чем в мышечной. В процессе холодного копчения в копченостях накапливается в среднем 15 мг% (9-24 мг%) фенолов.
При изучении вопроса о скорости и характере проникновения фе-нолов в колбасные изделия удобно пользоваться методом отпечатков, разработанным сотрудниками кафедры аналитической химии Воронежской государственной технологической академии, который основан на развитии качественной реакции фенолов в присутствии карбоната натрия и специального проявителя.
Количественное определение фенолов в колбасных изделиях про-водят одним из колориметрических методов. Суммарное определение содержания фенолов основано на измерении оптической плотности окрашенного раствора, цвет которого возникает в результате качественной реакции.
Другой метод суммарного определения содержания фенолов основан на получении нитрозосоединений при взаимодействии фенола с нитритом натрия. В результате реакции нитрозосоединение образует с избытком аммиака продукт, окрашенный в желтый цвет, который затем фотоэлектроколориметрируют.
Подготовка проб. Образцы продуктов (не менее 500 г) дважды измельчают на мясорубке.
Перед определением фенолов в копченых изделиях проводят органолептическую оценку продуктов. При этом осматривают поверхность колбасного батона, отмечают вид колбасной оболочки, групповой ассортимент и наименование колбасы (с помощью преподавателя). Путем визуальной оценки устанавливают цвет, состояние поверхности на разрезе, запах и вкус. Данные фиксируют в таблице результатов.
Определение границ проникновения фенолов
Приготовление реактивов и материалов. Фильтровальная бумага для определения границ проникновения фенолов. Фильтровальную бумагу погружают на 20-30 с в раствор Na2CO3 массовой долей 1%, после чего ее сушат на воздухе и хранят.
Проявитель для определения границ проникновения фенолов. 1 г 4-аминоанти-пирина растворяют в 50 см3 раствора этанола (96 об.%).
Порядок проведения анализа. Полученный со среза копченой колбасы отпечаток проникших фенолов должен быть видимым и отли-чаться по цвету от фона предварительно подготовленной фильтровальной бумаги. Подготовленную фильтровальную бумагу опрыскивают из пульверизатора проявителем и плотно прижимают к срезу колбасного батона. Спустя 20-30 с бумагу отделяют от поверхности среза колбасы и опрыскивают раствором персульфата аммония массовой долей 20%. Через 2 мин на бумаге образуется отчетливый, окрашенный в розовый цвет отпечаток границ проникновения фенолов. Отпечаток зарисовывают, измеряют с точностью до 0,1 мм границы проникновения или аккуратно вырезают ножницами и вносят в таблицу результатов.
Кроме этого метода существует колориметрический метод количественного определения фенолов на основе цветной реакции с 4-аминоантипирином и гексацианоферратом калия (ii), колориметриче-ский метод, основанный на получении нитрозосоединений при взаимодействии фенола с нитритом натрия
Определение бенз(а)пирена в копченных мясных продуктах
Объекты исследования. Колбасные изделия различного группового ассортимента: вареные, варено-копченые, полукопченые, сырокопченые, а также копчености.
Материалы, реактивы и оборудование. Петролейный эфир, смесь хло-роформ-петролейный эфир (1:2), н-октан, жидкий азот, колонка стеклянная длиной 120-140 мм, хроматографическая колонка (или пластинка), сосуд Дьюара, ртутно-кварцевая лампа ДРШ-250, ДРШ-50 (или ПРК-2), фильтр УФС-1 (или УФС-2), спек-трограф ИСП-51, эталонное вещество (1,12-бенз-перилен), чистый бенз(а)пирен, мя-сорубка, этанол, этиловый эфир, дистиллированная вода, безводный Na2SO4, оксид алюминия, бензол.
Методические указания. Полициклические ароматические углеводороды (ПАУ) присутствуют в продуктах растительного происхождения, копченых колбасах и копченостях Одним из наиболее известных представителей ПАУ является бенз(а)пирен (БП), содержание которого в копченых и полукопченых колбасах колеблется от 1 мкг до нескольких десятков микрограммов на 1 кг продукта, а в вареных - от 0,2 до 1,0 мкг/кг.
Для количественного определения канцерогенных ПАУ в пищевых продуктах широкое применение нашли люминесцентные методы исследования. Определение бенз(а)пирена и других канцерогенных ПАУ проводится по тонкой структуре спектра флуоресценции при низкой температуре.
Флуоресцентно-спектральный метод определения бенз(а)пирена включает несколько этапов извлечение из навески продукта фракции, содержащей ПАУ- очистку полученной фракции от примесей и хроматографическое разделение ПАУ- качественное определение БП и других ПАУ по спектрам люминесценции при температуре жидкого азота- количественное определение БП с помощью одной из модификаций спектрально-флуоресцентного метода (методом добавок или методом внутреннего стандарта).
При выполнении всех этапов выделения, очистки и фракциониро-вания ПАУ предел чувствительности метода равен 0,1-0,2 мкг/кг. По-грешность опыта составляет ± 10-15%.
Качественное определение БП проводят спектральным методом с использованием эффекта Э.В. Шпольского. При температуре минус 196°С получают спектры люминесценции отдельных фракций ПАУ, растворенных в нормальных парафиновых углеводородах. Спектры имеют тонкую структуру и называются квазилинейчатыми.
Подготовка проб. Из копченого продукта предварительно готовят фарш путем измельчения на мясорубке. К 1 кг фарша приливают 1 дм3 этанола, добавляют 150-250 г КОН (в зависимости от содержания жиров в продукте) и кипятят 1,5-2 ч для омыления липидов. Затем приливают 3-5-кратный объем дистиллированной воды и экстрагируют неомыляемые вещества этиловым эфиром. Первая порция эфира должна быть в 4-5 раз больше объема обраба-тываемого раствора. Последующие три-четыре порции эфира должны быть в 3 раза больше первой.
Эфирный экстракт несколько раз промывают дистиллированной водой, подкисляя первую порцию воды, потом сушат над безводным Na2SO4. Эфир отгоняют, остаток растворяют в бензоле и пропускают через колонку длиной 120-140 мм, заполненную оксидом алюминия. Адсорбированные в колонку ПАУ, отделенные от других неомыляемых веществ, элюируют бензолом до тех пор, пока не прекратится выделение фракции с синей флуоресценцией. Бензол отгоняют из элюата, а остаток фракционируют колоночной или тонкослойной хроматографией.
Выделенную смесь ПАУ, содержащую некоторые примеси, растворяют в 10-15 см3 петролейного эфира и наносят на заполненную оксидом алюминия колонку диаметром 10-14 мм и высотой 120-140 мм. Флуоресцирующие фракции ПАУ сначала элюируют петролейным эфиром, а затем с добавлением бензола. Бенз(а)пирен содержится в III, IV или V фракциях. Для более четкого отделения бенз(а)пирена можно повторить фракционирование колоночным методом или в тонком слое оксида алюминия. При использовании второго метода в качестве растворителя служит смесь хлороформ - петролейный эфир в соотношении 1:2.
Качественное определение бенз(а)пирена
Порядок проведения анализа. Для качественного определения БП используют смесь, состоящую из 1 см3 бензольного экстракта и 2 см3 н-октана. Пробирку со смесью помещают в сосуд Дьюара с жидким азотом. Возбуждают люминесценцию с помощью ртутно-кварцевой лампы ДРШ-250 (ДРШ-50 или ПРК-2), пропуская УФ-излучение через фильтр УФС-1 или УФС-2. При определении только БП (если другие фракции ПАУ не определяют) можно пользоваться также УФС-3 или УФС-4. Для записи спектра обычно используют спектрограф ИСП-51 с камерой ?=270 мм. В спектре замороженного н-октанового раствора БП имеются характерные квазилинии при длинах волн 403,0 и 408,5 нм.
Количественное определение бенз(а)пирена
Порядок проведения анализа. Количественное определение БП проводят с помощью флуоресцентно-спектрального метода. Оно может быть выполнено с использованием одной из двух модификаций, с помощью добавок и установкой прибора по фону, создаваемому люминесцирующими примесями, содержащимися в исследуемом экстракте, или с помощью внутреннего стандарта
При определении бенз(а)пирена с помощью первой из указанных модификаций исследуемый раствор сравнивают не с раствором чистого бенз(а)пирена, а с таким же исследуемым, но сильно разбавленным раствором при добавлении в него определенного количества чистого бенз(а)пирена (массовый излишек), на свечение которого посторонние вещества влияют так же, как и в исследуемом растворе.
При определении БП с помощью внутреннего стандарта в бенз(а)пиреновую фракцию вводят чистый эталон, дающий хороший квазилинейчатый спектр в аналогичных условиях, причем в спектре этого вещества не должно быть линий, перекрывающихся с аналитическими линиями бенз(а)пирена. Таким веществом (стандартом) обычно служит 1,12-бензперилен. В спектре Э.В. Шпольского н-октанового раствора 1,12-бензперилена есть четкая линия при ? = 406,3 нм, которая располагается между соответствующими линиями бенз(а)пирена, а вблизи аналитических линий бенз(а)пирена в спектре 1,12-бензперилена заметные линии отсутствуют. Стандарт вводят для сравнения и в эталонные растворы БП. В исследуемом растворе измеряют отношение интенсивности линии БП и добавленного вещества. Пользуясь ранее определенным по «растворам-свидетелям» отношением интенсивности линий для известных концентраций БП и вещества-стандарта и зная количество добавленного стандарта, находят количество БП в бенз(а)пиреновой фракции, выделенной из продукта.
Полученные результаты сводят в таблицу:
Полученные данные анализируют, формулируют выводы и дают санитарно-гигиеническую оценку копченых мясных продуктов.
Определение нитратов и нитритов
Объекты исследования. Мясо различных видов убойных живот-ных и птицы- субпродукты I и II категорий, колбасные изделия, продукты из свинины, говядины, баранины, мяса птицы- консервы, при изготовлении которых применяют нитрит натрия.
Методические указания. Среди перечня токсических и вредных веществ, обнаруживаемых в сырье и продуктах, большое практическое значение имеет определение нитрат- и нитритионов, источниками которых служат корма животных и собственно нитрит, добавляемый для имитации цвета при производстве мясных продук-тов.
Проблема производства экологически чистых продуктов питания связана с реализацией инструментальных методов контроля вредных веществ, применяемых в условиях производства и имеющих достаточ-ную точность и экспрессность. Существующие фотоколориметрические, хроматографические, спектрофотометрические и химические методы определения нитратов и нитритов не отвечают в полной мере требованиям и условиям производственных лабораторий. Методики имеют ряд недостатков: длительность, использование токсичных и дефицитных реактивов, дорогостоящей аппаратуры, определенный уровень требований к квалификации оператора для выполнения работ и т. д. По сравнению с перечисленными ионоселективный метод определения нитрат- и нитрит-ионов имеет ряд достоинств, прежде всего связанных с малой продолжительностью, точностью и простотой определения, а также компактностью приборов.
В зависимости от уровня материальной базы в аналитической практике могут быть применены те или иные методы. Принципы и основная суть их изложены ниже.
Ионометрический метод определения нитрат- и нитрит-ионов предусматривает использование ионоселективного (нитратного) элек-трода типа ЭМ-ЛО3-01 путем индикации и измерения ЭДС электрода на ионометре И-130 (или нитратомере). Ионометр предназначен для измерения активности ионов водорода (рН), одновалентных и двухвалентных анионов и катионов (рХ), окислительно-восстановительных потенциалов в цифровой форме и в виде сигналов постоянного тока. Содержание нитрат-ионов можно фиксировать без предварительного измерения рН. На точность измерения не влияет присутствие фосфора, белков и жиров. Не рекомендуется проводить определение в объектах, содержащих хлорид натрия в массовых концентрациях более 3,5%.
Измерение ЭДС и определение концентрации нитратов проводят в водной вытяжке, полученной из пробы продукта после предварительной экстракции при интенсивном перемешивании смеси с последующим фильтрованием.
Для исследования растворов с небольшими концентрациями нит-рат- и нитрит-ионов используют метод добавок. В 50 см3 вытяжки измеряют ЭДС, затем в нее вводят нитрат калия так, чтобы массовая концентрация нитрата увеличилась до значений, соответствующих предварительно построенному калибровочному графику. По разнице значений рассчитывают искомую величину.
Для определения содержания нитритов их окисляют персульфатом аммония до нитратов. Разность между найденным суммарным содержанием нитрат-ионов и начальной концентрацией нитрат-ионов равна концентрации нитрит-ионов.
Фотометрические методы применяют в ряде модификаций, каж-дая из которых имеет практическое значение в анализе мясных продуктов и основана на той или иной химической реакции с образованием специфически окрашенных растворов. Например, применяется метод, основанный на реакции нитрита с N-1-нафтилэтилендиамином дигидрохлорида и сульфаниламидом в фильтрате с удаленным белком с последующим фотометрированием или визуальным определением интенсивности окраски. При фотоколориметрическом определении интенсивности окраски метод соответствует международному стандарту и применяется при разногласиях в оценке.
Используют также метод, основанный на реакции нитрита с реактивом Грисса (смесь растворов сульфаниловой кислоты и а-нафтиламина в уксусной кислоте) в фильтрате с удаленным белком с последующим измерением интенсивности окраски на фотоколориметре.
Подготовка проб. С колбасных изделий снимают оболочку, с фаршированных колбас и языков в шпике - поверхностный слой шпика и оболочку, с окороков, лопаток, рулетов, корейки и грудинки - поверхностный слой шпика. Затем пробы дважды измельчают на мясорубке с отверстиями решетки диаметром от 3 до 4 мм. Продукты, полностью состоящие из шпика с промежуточными слоями мышечной ткани (ветчина в форме, прессованный бекон и аналогичные им), измельчают полностью.
Полученный фарш тщательно перемешивают, помещают в стеклянную или пластмассовую банку вместимостью от 200 до 400 см3, заполнив ее полностью, закрывают крышкой. Пробу хранят при 4±2 °С до окончания анализа. Анализ проводят не позднее чем через 24 ч после отбора проб. Пробу сырых продуктов анализируют сразу после измельчения.
Определение нитрат- и нитрит-ионов ионометрическим мето-дом
Материалы, реактивы и оборудование. Ионометр И-130 или нитрато-мер- ионоселективный электрод на NO3-ионы- электрод сравнения - хлорсеребря-ный- весы технические и аналитические- конические колбы вместимостью 250 см3- химические стаканы вместимостью 50 см3- мерный цилиндр вместимостью 100 см3- мерная колба вместимостью 1 дм3- пипетки вместимостью 5 и 10 см3- нитрат калия, ч.д.а.- водный раствор сульфата цинка массовой долей 0,45%- водный раствор суль-фата калия концентрацией (1/2 K2SO4) 1 моль/дм3- водный раствор гидроксида натрия NaOH (0,1 моль/дм3)- водный раствор персульфата аммония (NH4)S2O3 мас-совой долей 8%.
С целью определения рабочего диапазона концентраций нитрат-ионов предварительно строят калибровочный график.
Построение калибровочного графика. Навеску нитрата калия массой 10,1 г растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм3, доводят содержимое колбы водой до метки. Получают раствор нитрата калия молярной концентрацией 10–1 моль/дм3 (pNO3= 1). Методом последовательного разбавления из полученного раствора готовят серию стандартных растворов нитрата калия концентрацией 10–2, 10–3, 10–4 и 10–5 моль/дм3 (pNO3 равны соответственно 2, 3, 4 и 5).
В пять химических стаканов отбирают по 50 см3 стандартных растворов нитрата калия, в каждый стакан добавляют по 1 см3 раствора сульфата калия. Погрузив электроды в стаканы, в каждом растворе регистрируют ЭДС элемента, составленного из нитратселективного и хлорсеребряного электродов. Перед началом измерений электроды промывают несколько раз дистиллированной водой. Измерения выполняют, переходя от разбавленных растворов к концентрированным. По полученным измерениям строят калибровочный график в координатах Е =? (pNO3), откладывая по оси ординат значения Е (мВ), по оси абсцисс - соответствующие значения pNO3.
Порядок проведения анализа. Для определения нитрат-ионов в коническую колбу вместимостью 250 см3 помещают навеску продукта массой 10-20 г, взятую с точностью 0,01 г, добавляют 100 см3 дистиллированной воды (подогретой до 50-60 °С) и экстрагируют в течение 30 мин при непрерывном перемешивании. Содержимое колбы охлаждают и фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу. В полученном мутном растворе осаждают белки. Для этого добавляют к фильтрату 2,5 см3 раствора гидроксида натрия молярной концентрацией 0,1 моль/дм3 и 10 см3 раствора сульфата цинка мас-совой долей 0,45%, нагревают 5 мин на водяной бане при температуре кипения, охлаждают колбу и полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр. Фильтрат и промывные воды после промывания осадка белков на фильтре собирают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки раствором сульфата калия молярной концентрацией 1 моль/дм3. В прозрачном фильтрате измеряют ЭДС, по величине которой на калибровочном графике находят начальное содержание нитрат-ионов в растворе.
Для определения нитрит-ионов их окисляют персульфатом аммония до нитратов. К 25 см3 фильтрата добавляют 0,5 см3 раствора персульфата аммония массовой долей 8%, энергично перемешивают и через 5 мин измеряют ЭДС, по величине которой находят концентрацию нитрат-ионов после окисления нитрит-ионов, используя калибровочный график. Разность между найденным суммарным содержанием нитрат-ионов и начальной концентрацией нитрат-ионов равна концентрации нитрит-ионов, содержащихся в исследуемом растворе.
Содержание нитрат-ионов (мг %) в мясе и мясных продуктах находят по формуле:
где 62 - молярная масса эквивалента нитрат-ионов, г/моль- с - концентрация нитрат-ионов до окисления, найденная по калибровочному графику, моль/дм3- 100 - объем фильтрата, см3- т - навеска измельченного мяса, г.
Содержание нитрит-ионов (мг %) в мясе и мясных продуктах находят по формуле:
где 46 - молярная масса эквивалента нитрит-ионов, г/моль- с1 - концентрация нитрат-ионов после окисления, найденная по калибровочному графику, моль/дм , 100 - объем фильтрата, см3.
Определение нитритов фотометрическим методом
Материалы, реактивы и оборудование. Мясорубка- весы лабораторные- водяная баня- фотоэлектроколориметр или спектрофотометр- фильтровальная бумага- колбы мерные вместимостью 100, 200 и 1000 см3- пипетки мерные- калия гексацианоферрат- ацетат свинца- ледяная уксусная кислота- тетраборат натрия Na2B4O7 ? 10Н2О- нитрит натрия- растворы для осаждения белков: реактив Карреза I, реактив Карреза II, насыщенный раствор буры- растворы для проведения цветной реакции: раствор I, раствор II, раствор III, основной, рабочий и стандартные растворы нитрита натрия для построения калибровочного графика.
Приготовление реактивов. Реактив Карреза I: 106 г гексацианоферрата калия растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 1000 см3. Реактив хранят в склянке из темного стекла не более месяца.
Реактив Карреза II: 220 г ацетата цинка и 30 см3 ледяной уксусной кислоты растворяют в дистиллированной воде и доводят объем раствора до 1000 см3. Реактив хранят не более месяца.
Насыщенный раствор буры: 50 г тетрабората натрия растворяют в 1000 см3 теплой дистиллированной воды и охлаждают до 20±2 °С.
Растворы для проведения цветной реакции.
Раствор I. Растворяют, подогревая на водяной бане, 2 г амино-бензола суль-фамида NH2C6H4SO2NH2 в 800 см3 воды. Охлаждают, при необходимости фильтру-ют и добавляют, помешивая, 100 см3 концентрированной соляной кислоты (р20 1,19 г/см3), затем доливают водой до 1000 см3.
Раствор II. Растворяют в воде 0,25 г N-1-нафтилэтилендиамина дигидрохлорида C10H7NHCH2CH2NH2 ? 2НСl, доливают водой до 250 см3. Полученный раствор хранят в холодильнике, в хорошо укупоренной бутылке из коричневого стекла не более недели.
Раствор III. Разбавляют 445 см3 концентрированной соляной кислоты (р20 1,19 г/см3) водой до 1000 см3.
Порядок проведения анализа. Образец для анализа помещают в коническую колбу вместимостью 300 см3. Для освобождения от белков добавляют последовательно 5 см3 насыщенного раствора тетрабората натрия (буры) и 100 см3 воды при температуре не ниже 70 °С.
Нагревают колбу на кипящей бане в течение 15 мин, периодически встряхивая.
Дают колбе с содержимым остыть до комнатной температуры и добавляют последовательно 2 см3 реактива Карреза I и 2 см3 реактива Карреза II, тщательно перемешивая после каждого добавления.
Переливают содержимое в мерную колбу вместимостью 200 см3, доливают водой до метки и перемешивают. Содержимое колбы выдерживают в течение 30 мин при комнатной температуре.
Осторожно сливают верхний слой жидкости и фильтруют его через гофрированную фильтровальную бумагу, получая прозрачный раствор.
Пипеткой переносят часть фильтрата объемом не более 25 см3 в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доливают водой до 60 см3.
Добавляют 10 см3 раствора I для цветной реакции, затем 6 см3 раствора III для цветной реакции, перемешивают и оставляют на 5 мин в темноте при комнатной температуре.
Добавляют 2 см3 раствора II для цветной реакции, перемешивают и оставляют на 3-10 мин в темноте при комнатной температуре. Затем разбавляют водой до метки.
Измеряют показатель спектрального поглощения раствора на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре при длине волны около 538 нм.
Построение калибровочного графика. Для приготовления основного раствора нитрита натрия взвешивают навеску реактива, содержащую точно 1 г нитрита натрия, растворяют в воде, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 500 см3, доводят водой до метки и перемешивают.
Массу навески (г) для химически чистого реактива с массовой до-лей основного вещества 99% вычисляют по формуле
Для приготовления рабочего раствора 5 см3 основного раствора переносят в мерную колбу вместимостью 1000 см3, доводят водой до метки и перемешивают. Из полученного рабочего раствора готовят серию стандартных растворов: 5, 10 и 20 см3 рабочего раствора пипеткой вносят в три мерные колбы вместимостью 100 см3, доводят водой до метки и перемешивают.
Полученные стандартные растворы содержат в 1 см3 соответственно 2,5- 5,0 и 10,0 мкг нитрита натрия
Готовят три серии стандартных растворов, начиная каждый раз с приготовления основного раствора из новой навески нитрита натрия. Рабочий и стандартные растворы нитрита натрия нестойки, поэтому их готовят непосредственно перед построением калибровочного графика.
Для построения калибровочного графика в четыре мерные колбы вместимостью 100 см3 пипеткой вносят: в первую колбу для приготов-ления контрольного раствора 10 см3 воды, а в остальные по 10 см3 стандартных растворов, содержащих 2,5- 5,0 и 10,0 мкг нитрита натрия в 1 см3 раствора.
В каждую колбу добавляют по 50 см3 воды, по 10 см3 раствора I и по 6 см3 раствора III для проведения цветной реакции. Растворы в колбах перемешивают и выдерживают в темном месте в течение 5 мин. Добавляют 2 см3 раствора II для проведения цветной реакции, перемешивают и выдерживают 3-10 мин в темном месте при 20±2 °С.
Растворы в колбах доводят водой до метки и перемешивают. Измеряют интенсивность красной окраски на спектрофотометре при ? = 538 нм или фотоэлектроколориметре с зеленым светофильтром в кювете с толщиной поглощающего свет слоя 1 см в отношении контрольного раствора.
По полученным средним данным из трех стандартных растворов на миллиметровой бумаге размером 25?25 см строят калибровочный график. На оси абсцисс откладывают концентрацию нитрита натрия (мкг в 1 см3 окрашенного раствора)- на оси ординат - соответствующую оптическую плотность. Калибровочный график должен проходить через начало координат.
Если полученная оптическая плотность превышает максимальную оптическую плотность на калибровочном графике, то цветную реакцию проводят с меньшим объемом фильтрата.
Содержание нитритов (мг/кг) в пересчете на нитрит-ион вычисляют по формуле:
где с-концентрация нитрита натрия, найденная по калибровочному графику, мкг/см3, V1 - общий объем экстракта, см3, V2 - объем колориметрируе-мого раствора, см3, т - масса навески образца для анализа, г- V3 - объем фильтрата, взятый для про-ведения цветной реакции, см3.
Также существует метод определения нитрита натрия по реакции Грисса и метод определения нитратов по реакции с n-1-нафтилэтилен-диамином дигидрохлорида.
Поделиться в соцсетях:
Похожие
