Лабораторная диагностика онихомикозов

Эта глава написана не для сотрудников лабораторий, а для лечащих онихомикозы врачей, которые направляют материал в лаборатории. Здесь даны указания, как собирать материал для исследования, и описано, что представляют собой эти исследования. Врач должен знать, чего он требует от лаборатории и какие сведения и когда она может ему предоставить.

Микробиологическое исследование материала, взятого из пораженных ногтей, должно установить, во-первых, инфекционную природу заболевания и показать, что возбудитель - гриб и, во-вторых, вид или хотя бы род этого гриба. Первая задача решается почти всегда успешно, для этого требуется только микроскопическое исследование материала. Вторая задача решается редко и с успехом не более чем в половине случаев. Для установления вида возбудителя требуется посев материала на питательную среду с последующей идентификацией выделенной культуры. Эти методы сложнее, чем обычная микроскопия, и занимают немало времени. Вместе с тем только установление вида возбудителя, полученного в культуре, позволит определить этиологию онихомикоза. Знание этиологии определяет выбор системного противогрибкового средства, поэтому системное лечение лучше не начинать, не дождавшись ответа лаборатории. Однако ответ дают далеко не всегда. Виновным в этом часто оказывается врач.

Сбор материала

Правильный сбор материала из пораженных ногтей - залог успешного микробиологического исследования. Забирая материал, не всегда захватывают участки ногтя, содержащие жизнеспособные грибы. Нежизнеспособные грибы в культуре, естественно, не вырастут, и их вид установить не удастся.

Участок ногтя, который надо взять, определяется формой онихомикоза. Так, при поверхностной форме онихомикоза следует делать соскобы с поверхности ногтевой пластинки. При самой распространенной дистальной подногтевой форме наиболее жизнеспособные грибы располагаются под ногтевой пластинкой. Материал, который направляют на исследование, должен включать не только обрезок ногтевой пластинки, но и соскоб с ногтевого ложа, из-под пластинки. Кроме того, следует захватывать и области неизмененного ногтя, поскольку на границе между ними и пораженными участками ногтя располагаются самые активные грибы. При проксимальной подногтевой форме брать материал трудно. В этих случаях иногда, особенно если собираются проводить гистологическое исследование или дифференциальную диагностику, предпринимают биопсию ногтя, изредка используют бормашину. При паронихиях делают соскобы с проксимального валика и из-под него. Во всех случаях, чтобы избежать бактериальной контаминации, перед взятием образца следует обработать ноготь этиловым спиртом.

Микроскопия

Материал обрабатывают 10-30% раствором едкого кали, чтобы растворить кератин, и изучают под световым микроскопом. Чтобы лучше были видны части мицелия плесневых грибов, иногда к раствору едкого кали добавляют чернила. При микроскопии обнаруживают нитевидные гифы грибов или почкующиеся клетки (рис. 3.2.1). Таким образом, микроскопия дает заключение только о грибковой природе инфекции, но не о виде гриба-возбудителя. Конечно, результативность микроскопического исследования зависит от квалификации сотрудника лаборатории.

Рис. 3.2.1.

Микроскопия соскоба с ногтей, пораженных Т. rubrum. Видны гифы гриба

.



Культура

Проводят посев материала на стандартную среду Сабуро, часто с добавками антибиотиков. В диагностике дерматофитных инфекций принято добавлять в среду Сабуро циклогексимид, подавляющий рост грибов-контаминантов, попадающих из воздуха. Существуют готовые коммерческие среды с добавками антибиотиков и циклогексимида. Следует помнить, что многие плесневые грибы-недерматофиты и некоторые виды Candida не растут на среде с циклогексимидом, поэтому рекомендуется делать посев на среду Сабуро с циклогексимидом и на среду без него. Идентификацию видов обычно проводят при микроскопическом исследовании выросшей культуры или путем пересева на селективные среды (рис. 3.2.2-3.2.15).

Рис. 3.2.2.

Культура гриба Т. rubrum, выделенного из пораженных ногтей

. Получена на среде Сабуро (слева) и кукурузном агаре (справа).

Видео: Лабораторная диагностика инвазивных микозов

Рис. 3.2.3.

Культура гриба Т. mentagrophytes var. interdigitale, выделенного из пораженных ногтей

. Получена на среде Сабуро.

Рис. 3.2.4.

Культура гриба Candida albicans

. Получена на среде Сабуро.

Рис. 3.2.5.

Культура гриба Torulopsis glabrata, выделенного из пораженных ногтей

. Получена на среде Сабуро.

Рис. 3.2.7.

Микроморфология Acremonium sp., выделенного из пораженных ногтей

.

Видео: Лабораторная диагностика

Рис. 3.2.6.

Культура гриба Ulocladium sp., выделенного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.8.

Микроморфология Fusarium sp., вьщеленного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.9.

Микроморфология Scopulariopsis sp., выделенного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.10.

Микроморфология Candida albicans, выделенного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.11.

Микроморфология Altemaria sp., выделенного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.12.

Микроморфология Aspergillus sp., выделенного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.13.

Микроморфология Ulocladium sp , выделенного из пораженных ногтей

.

Рис. 3.2.14.

Микроморфология Chaetomium sp., выделенного из пораженных ногтей

.

Рис 3 2 15

Панель питательных фед для идентификации дерматофитов

(слева - культура Т rubrum, справа - Т mentagrophytes var. mterdigitale). Слева направо: среда Сабуро, среда Бакстера, среда Христенсена, кукурузный агар

Следует учесть, что некоторые плесневые грибы, в том числе дерматофиты, в культуре вырастают медленно, за 2-3 нед.

Даже при соблюдении всех правил сбора материала, при хорошем оборудовании лаборатории и высокой квалификации ее персонала число положительных результатов культурального исследования очень невелико. По данным зарубежной литературы, процент положительных исследований не превышает 50.

Процент положительных результатов в лучших отечественных лабораториях едва достигает 30. Таким образом, в 2 из каждых 3 случаев онихомикоза его этиологию установить не удается.

Интерпретация полученных результатов

Поскольку разные грибы принимают неодинаковое участие в поражениях ногтей, результаты культурального исследования следует оценивать тоже по-разному.

Выделение из пораженных ногтей гриба-дерматофита неоспоримо свидетельствует о дерматофитозе ногтей, вызванном этим грибом.

Выделение из ногтей Candida spp. само по себе ни о чем не говорит и имеет значение тогда, когда, во-первых, есть клинические проявления и, во-вторых, псевдомицелий Candida spp. виден при микроскопии пораженных ногтей.

Выделение плесневых грибов может быть диагностически значимым только тогда, когда эти грибы получены отдельно, а не вместе с дерматофитами, если они выделены в 5 из 20 культур и если в патологическом материале обнаруживается мицелий этих грибов. Эти критерии предложены М. English в 1976 г.

Прочие случаи выделения плесневых грибов следует расценивать или как контаминацию, или как смешанную инфекцию. Для аэрогенной контаминации характерен рост колоний гриба не вокруг исследуемого материала, а по всей поверхности среды (рис. 3.2.16).

Рис. 3.2.16.

Аэрогенная контаминация Alternaria sp

.

Смешанные инфекции, вызванные дерматофитами вместе с другими грибами, встречаются довольно часто, особенно у пожилых людей. Не стоит удивляться, если в культуре одновременно вырастают колонии грибов 3 видов и даже более (рис. 3.2.17, 3.2.18).

Рис. 3.2.17.

Смешанная инфекция, вызванная Т. rubrum и Curvularia sp

. Выделена из пораженных ногтей на кукурузном агаре.

Рис. 3.2.18.

Смешанная инфекция Scopulariopsis sp. и Т. mentagrophytes var. interdigitale

.<< ПредыдушаяСледующая >>
Внимание, только СЕГОДНЯ!